Adaptación a la realidad de Latinoamérica de la Guía Clínica NASPGHAN/ESPGHAN 2016 sobre Diagnóstico, Prevención y Tratamiento de Infección por Helicobacter pylori en Pediatría / Adaptation to the reality of Latin America of the NASPGHAN/ESPGHAN 2016 Guidelines on the Diagnosis, Prevention and Treatment of Helicobacter pylori Infection in Pediatrics

Resumen: Introducción: Las últimas guías clínicas conjuntas de NASPGHAN y ESPGHAN en relación a la infección por H. pylori publicadas el año 2016, contienen 20 afirmaciones que han sido cuestionadas en la práctica respecto a su aplicabilidad en Latinoamérica (LA); en particular en relación a la preven ción del cáncer gástrico. Métodos: Se realizó un análisis crítico de la literatura, con especial énfasis en datos de LA y se estableció el nivel de evidencia y nivel de recomendación de las afirmaciones mas controversiales de las Guías Conjuntas. Se realizaron 2 rondas de votación de acuerdo a la técnica Delfi de consenso y se utilizó escala de Likert (de 0 a 4) para establecer el "grado de acuerdo" entre un grupo de expertos de SLAGHNP. Resultados: Existen pocos estudios en relación a diagnóstico, efectividad de tratamiento y susceptibilidad a antibióticos de H. pylori en pacientes pediátricos de LA. En base a estos estudios, extrapolaciones de estudios de adultos y la experiencia clínica del panel de expertos participantes, se realizan las siguientes recomendaciones. Recomendamos la toma de biopsias para test rápido de ureasa e histología (y muestras para cultivo o técnicas moleculares, cuando estén disponibles) durante la endoscopia digestiva alta sólo si en caso de confirmar la infección por H. pylori, se indicará tratamiento de erradicación. Recomendamos que centros regionales seleccio nados realicen estudios de sensibilidad/resistencia antimicrobiana para H. pylori y así actúen como centros de referencia para toda LA. En caso de falla de erradicación de H. pylori con tratamiento de primera línea, recomendamos tratamiento empírico con terapia cuádruple con inhibidor de bomba de protones, amoxicilina, metronidazol y bismuto por 14 días. En caso de falla de erradicación con el esquema de segunda línea, se recomienda indicar un tratamiento individualizado considerando la edad del paciente, el esquema indicado previamente y la sensibilidad antibiótica de la cepa, lo que implica realizar una nueva endoscopía con extracción de muestra para cultivo y antibiograma o es tudio molecular de resistencia. En niños sintomáticos referidos a endoscopía que tengan antecedente de familiar de primer o segundo grado con cáncer gástrico, se recomienda considerar la búsqueda de H. pylori mediante técnica directa durante la endoscopia (y erradicarlo cuando es detectado). Con clusiones: La evidencia apoya mayoritariamente los conceptos generales de las Guías NASPGHAN/ ESPGHAN 2016, pero es necesario adaptarlas a la realidad de LA, con énfasis en el desarrollo de centros regionales para el estudio de sensibilidad a antibióticos y mejorar la correcta selección del tratamiento de erradicación. En niños sintomáticos con antecedente familiar de primer o segundo grado de cáncer gástrico, se debe considerar la búsqueda y erradicación de H. pylori.

Abstract: Introduction: The latest joint H. pylori NASPGHAN and ESPGHAN clinical guidelines published in 2016, contain 20 statements that have been questioned in practice regarding their applicability in Latin America (LA); in particular in relation to gastric cancer prevention. Methods: We conduc ted a critical analysis of the literature, with special emphasis on LA data and established the level of evidence and level of recommendation of the most controversial claims in the Joint Guidelines. Two rounds of voting were conducted according to the Delphi consensus technique and a Likert scale (from 0 to 4) was used to establish the "degree of agreement" among a panel of SLAGHNP ex perts. Results: There are few studies regarding diagnosis, treatment effectiveness and susceptibility to antibiotics of H. pylori in pediatric patients of LA. Based on these studies, extrapolations from adult studies, and the clinical experience of the participating expert panel, the following recom mendations are made. We recommend taking biopsies for rapid urease and histology testing (and samples for culture or molecular techniques, when available) during upper endoscopy only if in case of confirmed H. pylori infection, eradication treatment will be indicated. We recommend that selected regional centers conduct antimicrobial sensitivity/resistance studies for H. pylori and thus act as reference centers for all LA. In case of failure to eradicate H. pylori with first-line treatment, we recommend empirical treatment with quadruple therapy with proton pump inhibitor, amoxi cillin, metronidazole, and bismuth for 14 days. In case of eradication failure with the second line scheme, it is recommended to indicate an individualized treatment considering the age of the pa tient, the previously indicated scheme and the antibiotic sensitivity of the strain, which implies performing a new endoscopy with sample extraction for culture and antibiogram or molecular resistance study. In symptomatic children referred to endoscopy who have a history of first or se cond degree family members with gastric cancer, it is recommended to consider the search for H. pylori by direct technique during endoscopy (and eradicate it when detected). Conclusions: The evidence supports most of the general concepts of the NASPGHAN/ESPGHAN 2016 Guidelines, but it is necessary to adapt them to the reality of LA, with emphasis on the development of regional centers for the study of antibiotic sensitivity and to improve the correct selection of the eradication treatment. In symptomatic children with a family history of first or second degree gastric cancer, the search for and eradication of H. pylori should be considered.

Evaluación de la elución de sensidiscos para la determinación de susceptibilidad a colistín en bacilos gramnegativos multi-resistentes / Evaluation of sensi-disk elution for colistin susceptibility determination in multidrug resistant gramnegative bacilli

Resumen Utilizando cepas clínicas de bacilos gramnegativos multi-resistentes (MDR), comparamos las CIM obtenidas de la microdilución en caldo, el método de referencia y el método de elución de sensidiscos. Encontramos que, con la excepción de A. baumannii, los resultados fueron muy similares. El método de elución de sensidiscos podría ser una buena alternativa y confiable para la determinación de la resistencia a colistín.

Abstract Using clinical strains of multidrug resistant (MDR) Gram negative bacilli, we compared MICs obtained from both broth microdilution, the reference method, and sensi-disk elution method. We found that, with A. baumannii exception, results were very similar. Sensi-disk elution method could be a good and reliable alternative for colistin resistance determination.

Resistencia a cefalosporinas de espectro extendido en enterobacterias sin AmpC inducible: Evaluación de los nuevos puntos de corte / Resistance to extended-spectrum cephalosporins in non-inducible AmpC enterobacteria: Evaluation of the new MIC breakpoints

Los objetivos de este estudio fueron determinar la actividad in vitro de las cefalosporinas de espectro extendido frente a aislamientos clínicos de enterobacterias sin AmpC inducible y evaluar la utilidad de las normativas propuestas por el CLSI 2009 y de los puntos de corte recomendados por el CLSI 2010 y el EUCAST 2010. El análisis incluye la caracterización feno y genotípica de los mecanismos de resistencia. En todos los aislamientos se realizó un antibiograma semicuantitativo y se determinó la CIM por dilución en agar. Asimismo, se realizó la detección fenotípica de p-lactamasas de espectro extendido (BLEE), de AmpC plasmídica (AmpCp) y de carbapenemasas de tipo KPC. En los aislamientos que fueron resistentes a las cefalosporinas de espectro extendido (CEE) se evaluó, mediante PCR múltiple para b/aSHV y b/aCTX-M y PCR con cebadores específicos, el tipo de p-lactamasa pre-valente y la presencia de KPC. Se recuperaron de pacientes 169 aislamientos resistentes a CEE: 95 de K/ebsie//a pneumoniae, 55 de Escherichia co/i y 19 de Proteus mirabi/is. La resistencia a CEE se verificó en el 56,2 %; 32,6 % y 11,2 % de estos conjuntos de aislamientos, respectivamente. Se detectó el fenotipo BLEE en 152 aislamientos (90 %), el fenotipo AmpCp en 12 (7 %) y el KPC en 5 (3 %). Las recomendaciones del CLSI 2009 y los puntos de corte del CLSI 2010 y del EUCAST 2010 para la ceftriaxona permitieron detectar eficientemente las BLEE, mientras que para la ceftacidima, con los puntos de corte del CLSI 2010 solo se detectó el 55 % de las BLEE. Esta discrepancia en los porcentajes de resistencia a ceftriaxona y a ceftacidima se relaciona con la presencia de CTX-M en nuestro medio. Los nuevos puntos de corte detectaron con mayor eficiencia las enzimas de tipo AmpCp.

The aims of this study were to evaluate the in vitro activity of extended-spectrum cephalosporins (ESC) in non-inducible AmpC enterobacteria throµgh phenotypic and genotypic characterization of the mechanisms of resistance (ESBL, plasmid-mediated AmpC and KPC) and to evaluate the interpretation criteria proposed by the existing recommendations and the new breakpoints established by the CLSI and the EUCAST. Susceptibility tests and PCR multiplex for b/aSHV and b/aCTX-M and amplification using specific primers was performed. One hundred sixty nine resistant isolates: K/ebsie//a pneumoniae (95), Escherichia co/i (55), and Proteus mirabi/is (19) were recovered. ESC resistance was 56.2 %, 32.6%, and 11.2 %, respectively. ESBL was detected in 152 (90 %) isolates, plasmid-mediated AmpC in 12 (7 %) and KPC in 5 (3 %). The CLSI 2009 recommendations and the breakpoints sµggested by the CLSI 2010 and the EUCAST for ceftriaxone were efficacious to detect ESBL, whereas the different breakpoints for ceftazidime presented discrepancies. The CLSI 2010 breakpoints only detected 55 % of the ESBL-producing isolates due to the endemic presence of CTX-M ESBLs in our country. Regarding the plasmid-mediated AmpC producers, the recommendations of the CLSI 2010 and the EUCAST 2010 proved to be more efficient than the old ones.

Capacidad de los laboratorios nacionales de referencia en Latinoamérica para detectar mecanismos de resistencia emergentes / Capability of national reference laboratories in Latin America to detect emerging resistance mechanisms

Objetivo. Evaluar la capacidad de 17 laboratorios nacionales de referencia que participan en el Programa Latinoamericano de Control de Calidad en Bacteriología y Resistencia a los Antimicrobianos (LA-EQAS) para detectar mecanismos de resistencia emergentes, a saber: resistencia de enterobacterias a carbapenemes por presencia de Klebsiella pneumoniae carbapenemasa (KPC); resistencia de enterobacterias a carbapenemes por presencia de metalobetalactamasas (MBL) tipo IMP, y resistencia intermedia a vancomicina de aislamientos de Staphylococcus aureus (VISA). Métodos. Se enviaron los siguientes tres aislamientos a los 17 laboratorios participantes del LA-EQAS: Klebsiella pneumoniae OPS-161 productor de KPC, Enterobacter cloacae OPS-166 productor de IMP y S. aureus OPS-165 con resistencia intermedia a vancomicina. Se evaluó la interpretación de las pruebas de sensibilidad y detección del mecanismo de resistencia y el tamaño de los halos de inhibición (método de difusión por discos) o valor de la concentración inhibitoria mínima (CIM). Resultados. La concordancia en la detección de los mecanismos de resistencia fue de 76,4%, 73,3% y 66,7% con respecto a la cepas K. pneumoniae OPS-161, E. cloacae OPS-166 y S. aureus OPS-165, respectivamente. La concordancia entre las zonas de inhibición obtenidas por los laboratorios participantes y los rangos establecidos por el laboratorio coordinador fue aceptable en los tres aislamientos, ya que alcanzó 90,8%, 92,8% y 88,9%, respectivamente, para cada cepa. Conclusiones. La concordancia global en la detección de los mecanismos de resistencia KPC, MBL y VISA fue de 72,1%. Consideramos que los laboratorios nacionales de referencia de América Latina son capaces de reconocer estos mecanismos de resistencia emergentes y se espera que en el futuro la concordancia alcance su nivel máximo.

Objective. To evaluate the capability of 17 national reference laboratories participating in the Latin American Quality Control Program in Bacteriology and Antibiotic Resistance (LA-EQAS) to detect emerging resistance mechanisms— namely: resistance of enterobacteria to carbapenems due to the presence of Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) and metallo-beta-lactamase (MBL) type IMP, and intermediate resistance of Staphylococcus aureus isolates to vancomycin (vancomycinintermediate resistant S. aureus—VISA). Methods. The following three isolates were sent to the 17 participating LA-EQAS laboratories: KPC-producing Klebsiella pneumoniae PAHO-161, IMP-producing Enterobacter cloacae PAHO-166, and S. aureus PAHO-165 with intermediate resistance to vancomycin. Performance of each of the following operations was evaluated: interpretation of sensitivity tests, detection of the resistance mechanism, and assessment of either inhibition halo size (disk diffusion method) or minimum inhibitory concentration (MIC). Results. Concordance in the detection of resistance mechanisms was 76.4%, 73.3%, and 66.7% for the K. pneumoniae PAHO-161, E. cloacae PAHO-166, and S. aureus PAHO- 165 strains, respectively. Concordance between the inhibition areas observed by the participating laboratories and the ranges established by the coordinating laboratory was acceptable for all three isolates, at 90.8%, 92.8%, and 88.9%, respectively. Conclusions. Overall concordance in on the detection of KPC, MBL, and VISA resistance mechanisms was 72.1%. We consider the national reference laboratories in Latin America capable of recognizing these emerging resistance mechanisms and expect that maximum levels of concordance will be reached in the future.

Radiografia torácica e bacteriologia na fase inicial de tratamento de 800 pacientes masculinos com tuberculose pulmonar / Chest X-ray and bacteriology in the initial phase of treatment of 800 male patients with pulmonary tuberculosis

OBJETIVO: Avaliar radiografias de tórax de pacientes com tuberculose pulmonar e determinar se a extensão das lesões radiográficas correlaciona-se com os parâmetros bacteriológicos. MÉTODOS: Neste estudo descritivo e retrospectivo; foram avaliadas radiografias de tórax, baciloscopias para BAAR e culturas de escarro para Mycobacterium tuberculosis no momento basal e durante os dois primeiros meses de tratamento. A amostra foi composta por 800 pacientes masculinos internados entre 1995 até o presente em um hospital com 250 leitos no noroeste da Turquia. RESULTADOS: A VHS média inicial foi de 58 ± 37 mm/h. Inicialmente, a baciloscopia e as culturas de escarro tiveram resultado positivo em 83,8 por cento e em 89,5 por cento dos pacientes, respectivamente. Após o primeiro mês do tratamento, a proporção de culturas positivas foi maior nos pacientes com doença cavitária do que naqueles sem doença cavitária (53,7 por cento vs. 37,7 por cento; p < 0,001). Não houve correlação do número de zonas afetadas com idade, duração de sintomas, contato com paciente com tuberculose ativa, diabetes concomitante (p > 0.05 para todos), mas houve correlação positiva com VHS (r = 0,23, p < 0,001). Durante o primeiro e o segundo mês de tratamento, a negativação da baciloscopia foi menos frequente nos pacientes com comprometimento bilateral do que naqueles com comprometimento unilateral (p < 0,001 e p = 0,002 para os meses 1 e 2, respectivamente). A extensão da doença não se correlacionou com idade, duração dos sintomas, contato com paciente com tuberculose ativa e diabetes concomitante, mas sim com a recuperação bacteriológica atrasada. CONCLUSÕES: Radiografias de tórax e bacteriologia são ferramentas valiosas na avaliação de tuberculose pulmonar.

OBJECTIVE: To evaluate chest X-rays of patients with pulmonary tuberculosis and to determine whether the extent of radiographic lesions correlates with bacteriological parameters. METHODS: In this retrospective, descriptive study, we evaluated chest X-rays, as well as AFB detection by smear microscopy and culture for Mycobacterium tuberculosis, initially and during the first two months of treatment, in 800 male patients hospitalized between 1995 and the present at a 250-bed hospital in northwestern Turkey. RESULTS: The initial mean ESR was 58 ± 37 mm/h. Initial sputum smears and cultures were positive in 83.8 percent and 89.5 percent of the patients, respectively. After the first month of treatment, the proportion of patients with positive sputum culture was higher among those with cavitary tuberculosis than among those with non-cavitary tuberculosis (53.7 percent vs. 37.7 percent, p < 0.001). The number of affected zones was not correlated with age, symptom duration, contact with an active tuberculosis patient, or concomitant diabetes (p > 0.05 for all) but was positively correlated with the ESR (r = 0.23, p < 0.001). During the first and second months of treatment, conversion to smear-negative status was less common in patients with bilateral involvement than in those with unilateral involvement (p < 0.001 and p = 0.002 for months 1 and 2, respectively). Disease extent did not correlate with age, symptom duration, contact with an active tuberculosis patient, or concomitant diabetes but did correlate with delayed bacteriological recovery. CONCLUSIONS: Chest X-ray and bacteriology are valuable tools for the evaluation of pulmonary tuberculosis.

Criterios de ensayo, interpretación e informe de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los bacilos gram negativos no fermentadores de importancia clínica: recomendaciones de la Subcomisión de Antimicrobianos de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas, Asociación Argentina de Microbiología / Antimicrobial susceptibility testing in clinically relevant non-fermenting gram-negative bacilli: recommendations from the Antimicrobial Agents Subcommittee of the Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas, Asociación Argentina de Microbiología

En este documento se dan a conocer una serie de recomendaciones para el ensayo, la lectura, la interpretación y el informe de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos para los bacilos gram negativos no fermentadores (BGNNF) que se aíslan en humanos. Se adoptaron como base las recomendaciones internacionales, las de la Subcomisión de Antimicrobianos de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas y las de un grupo de expertos invitados. Se incluye, además, la nomenclatura actualizada de los BGNNF y la descripción de algunas de sus características individuales, de sus resistencias naturales o habituales a los antimicrobianos de uso clínico y de los mecanismos responsables de tales resistencias. También se indican los agentes antimicrobianos que se deberían ensayar frente a las distintas especies, con la especificación de cuáles deberían ser informados, y su ubicación estratégica en las placas de cultivo para poder detectar los mecanismos de resistencia más frecuentes y relevantes. Por último, se detallan los métodos de detección y de confirmación fenotípica de la presencia de b-lactamasas emergentes en Argentina, como las carbapenemasas clases A y B.

This document contains the recommendations for antimicrobial susceptibility testing of the clinically relevant non-fermenting gram-negative bacilli (NFGNB), adopted after conforming those from international committees to the experience of the Antimicrobial Agents Subcommittee members and invited experts. This document includes an update on NFGNB classification and description, as well as some specific descriptions regarding natural or frequent antimicrobial resistance and a brief account of associated resistance mechanisms. These recommendations not only suggest the antimicrobial drugs to be evaluated in each case, but also provide an optimization of the disk diffusion layout and a selection of results to be reported. Finally, this document also includes a summary of the different methodological approaches that may be used for detection and confirmation of emerging b-lactamases, such as class A and B carbapenemases.

Recomendaciones para el análisis de datos acumulados de susceptibilidad antimicrobiana en instituciones de salud / Recommendations for the analysis of cumulated data in antimicrobial susceptibility in health institutions

Due to the great variability in antimicrobial resistance patterns, local reports of cumulative antimicrobial susceptibility data are necessary in every health center. The purpose is to guide clinical decisions and the early detection of patterns that allow preventive measures to avoid dissemination of resistant strains. The main objective of this guide is to provide recommendations for the analysis of antimicrobial susceptibility data and elaboration of a local report. Recommendations provided in this guide are based on the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) document "Analysis and Presentation of Cumulative Antimicrobial Susceptibility Test Data" (3). Key aspects related to information gathering and data processing, analysis and presentation are described.

Considerando la gran variabilidad en la distribución de la resistencia microbiana, es una necesidad que cada centro de salud genere reportes locales de datos acumulados de susceptibilidad, con el propósito de guiar las decisiones clínicas y detectar tendencias que permitan establecer medidas de prevención para evitar la diseminación de cepas resistentes. Esta guía tiene como objetivo entregar recomendaciones para el análisis de susceptibilidad antimicrobiana y aportar datos útiles para la elaboración del informe local. Las recomendaciones que contenidas em este documento están basadas en el documento "Analysis and Presentation of Cumulative Antimicrobial Susceptibility Test Data de Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (3). Se describen aspectos claves relacionados con los requerimientos de la información, el procesamiento de los datos, el análisis y presentación de éstos.

Standardization of first and second-line antitubercular susceptibility testing using BacT Alert 3D system: a report from a tertiary care centre in India

Resurgence of multidrug resistant tuberculosis has lead to demand for rapid susceptibility testing. Conventional methods take > 3 weeks and are tedious. Automated methods have superseded them for first line drug susceptibility testing. An attempt was made to standardize first and second line susceptibility testing using the BacT Alert 3D system (Biomerieux). And compare results with Lowenstein Jensen's (LJ) method. 121 isolates of Mycobacterium tuberculosis, 67 pulmonary and 54 extra pulmonary were subjected to sensitivity to first and second line drugs. Multidrug resistance was detected equally by both methods at 15.7 percent. 100 percent agreement was observed between the two methods for aminoglycosides, rifampicin, ethionamide and ciprofloxacin. 91.5 percent agreement was observed for isoniazid, 85 percent for pyrazinamide and 72.4 percent for ethambutol. The time taken by LJ method was 18-32 days and BacT Alert 3D system took 4-12 days. In the lesser developed nations where tuberculosis is rampant a rapid effective method for confirming multidrug resistant tuberculosis is definitely desirable and the BacT Alert 3D system was found an effective method when compared to the 'gold standard' LJ proportion.

Actualización en pruebas de susceptibilidad antifúngica / An update on antifungal susceptibility testing

Due to increasing of invasive fungal infections and emergeney of antifungal drugs resistant fungi, standardized methods of antifungal susceptibility testing (AST) have been developed. The Clinical Laboratory Standards Instutute (CLSI) and the European for Committee Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) have guidelines for susceptibility of yeasts by broth microdilution (M27-A2 and E. Dis. 7.1 documents, respectively). Both are equivalent, although they present methodological and interpretative breakpoints differences. In addition, the CLSI have the M38-A (for filamentous fungi) and M44-A (disk diffusion) documents, whereas EUCAST is developing a document for Aspergillus spp. Furthermore, commercial methods are available that display good correlation with the methods of reference such as E-test®, Sensititre® and Vitek2®. The interpretation of the results must be careful because the determination of the minimum inhibitory concentration (CIM) is difficult for fungi, there are host factors involved and not always there is a correlation between MIC and clinical outeome. Due to these methods are laborious and require trained personnel, to ask for AST to a reference laboratory is recommendable.

Debido al aumento en las infecciones fúngicas invasores y a la emergencia de hongos resistentes a los antifúngicos, ha sido necesario desarrollar métodos estandarizados de susceptibilidad antifúngica. El Clinical Laboratory Standards Instutute (CLSI) y el European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) han elaborado guías para susceptibilidad de levaduras por microdilución en caldo (documentos M27-A2 y E. Dis. 7.1, respectivamente). Ambos son equivalentes, aunque presentan diferencias metodológicas y en sus puntos de corte. El CLSI ha desarrollado los documentos M38-A (hongos filamentosos) y M44-A (difusión en disco), mientras que EUCAST trabaja en un documento para Aspergillus sp. Por otra parte, existen métodos comerciales que presentan buena correlación con los métodos de referencia como E-test®, Sensititre® y Vitek2®. La interpretación de los resultados debe ser cuidadosa pues la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM) es muy dificultosa para hongos, hay factores del hospedero involucrados y no siempre hay una correlación entre la CIM y la respuesta a tratamiento. Como estas técnicas, en general, son laboriosas y requieren de personal entrenado, es recomendable derivar los estudios de susceptibilidad a un laboratorio de referencia.

Experiencia de educación continua basada en la notificación voluntaria de urocultivos y antibiogramas / Experience of continuous education through the voluntary notification of urine cultures and disk diffusion tests

Durante el desarrollo de diversos cursos de Bacteriología, tanto presenciales como a distancia, del Programa de Educación Continua (PROECO) de la Fundación Bioquímica Argentina, se solicitó a los colegas la notificación voluntaria de los resultados de los urocultivos y antibiogramas pertenecientes a pacientes ambulatorios, realizados entre el 1º de mayo y el 31 de julio de 2004 en los laboratorios en donde se desempeñaban. Del presente trabajo participaron ochenta y seis bioquímicos de treinta ciudades correspondientes a cuatro provincias argentinas. El objetivo general fue evaluar la importancia de las actividades de educación continua basadas en el análisis del trabajo cotidiano, a través de la notificación de los resultados de laboratorio de los urocultivos y antibiogramas, utilizando el papel didáctico del error como estrategia para aproximar la teoría y la práctica, con el objeto de implementar acciones que permitan normatizar los procedimientos de laboratorio y mejorar la calidad de los mismos. Con los resultados se confeccionó una base de datos en los programas de computación Excel 6.1 y SPSS 10.0 para procesarlos estadísticamente. De 1.260 datos, el 80% fueron aportados por los laboratorios privados y los restantes por los hospitales públicos y centros de atención primaria de salud municipales. El 80,6% de las muestras pertenecieron a mujeres y el 89% de los aislamientos correspondieron a bacilos gramnegativos. El agente más frecuente fue Escherichia coli 835 (66,3%); seguido por Proteus spp. 104 (8,3%); Klebsiella spp. 83 (6,6%); Staphylococcus spp. 79 (6,2%); Enterococcus spp. 43 (3,4%) y otros 116 (9,2%). Al analizar comparativamente las resistencias a antibióticos en los laboratorios privados y hospitalarios respecto de las publicadas por centros de referencia nacionales se encontraron similitudes y diferencias. Los errores de procedimiento detectados, tanto en la identificación de gérmenes como en los antibióticos ensayados, permitieron avanzar en la normatización de las técnicas. Desde el PROECO se dirigió una tarea de capacitación entre pares con supervisión docente, dentro de los talleres participativos nominales, enfatizando el valor del trabajo en el proceso de aprendizaje y favoreciendo la accesibilidad a los conocimientos. Esto también mostró la potencialidad del impacto indirecto de un programa de educación sobre actividades de vigilancia epidemiológica y la importancia que tiene la notificación de resultados de distintas patologías por parte de los laboratorios privados que aportaron cuatro veces más datos que el sector público, lo cual resulta interesante al momento de tomar medidas de prevención y la actualización de guías de tratamiento, incidiendo tanto sobre la prescripción médica como en la aún persistente venta directa de antibióticos en las farmacias. Esta publicación pretende ser un aporte preliminar para hacer notar la importancia de instalar una actividad de notificación de resultados con continuidad por parte del sector bioquímico privado y público, basada en el análisis de datos reales de la atención primaria de la salud, que contribuya a la toma de medidas sanitarias pertinentes en relación con diversas patologías.

During the development of diverse courses on Bacteriology such as in site classes or Distance learn-ing classes, of the Program of Continuous Education (PROECO) of the Fundación Bioquímica Argentina, colleagues were requested the voluntary notification of the results of urine cultures and disk diffusion tests from outpatients, carried out from May 1 to July 31, 2004 in the laboratories where they worked. Eighty-six biochemists from thirty cities from four Argentine provinces participated in this work. The general objective was to evaluate the importance of the activities of continuous education based on the analysis of daily work, through the notification of the laboratory results of urine cultures and disk diffusion tests using the didactic error as a strategy to approach theory to practice, in order to achieve actions that make it possible to standardize the laboratory procedures and to improve their quality. With the results a database was made using Excel 6.1 and SPSS 10.0 for statistical processing. A total of 1008 out of 1260 (80%) data were provided given by private laboratories and the 20% remaining by public hospitals and municipal centers of primary health attention. 80.6% of the samples belonged to women and in 89% of the cases gramnegative bacilli were isolated. The most frequent agent was Escherichia coli 835 out of 1260 (66.3%); followed by Proteus spp. 104 out of 1260 (8.3%); Klebsiella spp. 83 out of 1260 (6.6%); Staphylococcus spp. 79 out of 1260 (6.2%); Enterococcus spp. 43 out of 1260 (3.4%) and other 116 out of 1260 (9.2%). There were similarities and differences in the comparison of the resistances to antibiotics in private and public hospital laboratories with those published by the national reference center. The procedure errors detected both in the identification of germs and in the rehearsed antibiotics enabled the improvement of the standardization of the techniques. PROECO ran a training task among colleagues with educational supervision, inside the nominal participatory workshops, emphasizing the value of work in the learning process improving the accessibility to knowledge. This also showed the potentiality of the indirect impact of an educational program about epidemic surveillance, and the importance of the notification of results of different diseases from private laboratories, which contributed with four times more data than the public sector, which is interesting at the moment of taking prevention and treatment measures, impacting both on the medical prescription and on the dispensation of antibiotics by pharmacists. This article tries to be a preliminary contribution to highlight the importance of achieving an activity of notification of the results with continuity by the private biochemical sector that contributes to take pertinent sanitary measures in relation to different diseases.

Susceptibility tests to second line drugs and re-treatment of tuberculosis: revisiting early experiences / Las pruebas de sensibilidad a drogas de segunda línea y el re-tratamiento de la tuberculosis: visión retrospectiva de tres estudios

The value of susceptibility tests in guiding antituberculous therapy with second-line drugs remains controversial. We reanalyzed three reports regarding the relationship between in vitro susceptibility of Mycobacterium tuberculosis and the clinical outcome of in-patients treated with these drugs at the Muñiz Hospital, Buenos Aires, during the sixties. These patients had been irregularly treated with a standard regimen consisting of isoniazid, streptomycin and PAS; they developed resistance to at least the first two drugs and persisted culture-positive. Susceptibility testing to ethionamide, cycloserine and kanamycin were performed by the proportion method on Löwenstein Jensen medium. Some level of resistance was detected among isolates from patients not previously treated with these drugs, that could be due to cross resistance with previously administered first line structural analogs. However, the studies evidenced significant association between resistance to ethionamide and cycloserine and prior treatment with these drugs. Increased resistance to all three drugs was detected within the first three months of treatment. In vitro resistance to ethionamide emerged earlier and was the most frequent followed by resistance to cycloserine and kanamycin. The low frequency of resistance to kanamycin could be related to the low dosage of this drug used at that time. Simultaneous resistance to the three agents, but not to two or one drug, appeared to be a marker of treatment failure. An apparent reversion of drug resistance was observed in near 6% of patients, for whom susceptibility tests were repeated on subsequent isolates, indicating this percentage of inconsistency in reproducibility of test results.

La correlación entre resultados de pruebas de sensibilidad a drogas antituberculosas de segunda línea y evolución de los pacientes en tratamiento, aún es discutida. Se reanalizan aquí tres estudios realizados en la década del 60, sobre la relación entre resultados de pruebas de sensibilidad y tratamiento con estas drogas, en pacientes crónicos, internados en el hospital Muñiz, Buenos Aires, que habían sido tratados con el entonces régimen estándar, integrado por isoniacida, estreptomicina y PAS; se habían hecho resistentes al menos a dos de estas drogas y continuaban con cultivo positivo. La prueba de sensibilidad a etionamida, cicloserina y kanamicina se efectuó por el método de las proporciones en medio Löwenstein Jensen. Entre 4 y 13% de los pacientes previamente no tratados con estas drogas presentó cierto nivel de resistencia, fenómeno atribuido a la administración previa de drogas de primera línea con moléculas análogas. Se halló asociación significativa entre resistencia a etionamida y cicloserina, y tratamiento previo con estas drogas. La resistencia a las tres drogas fue detectada en los primeros tres meses de tratamiento, siendo la resistencia a etionamida la más frecuente, y la primera en emerger, seguida por cicloserina y kanamicina, cuya baja frecuencia en alcanzar resistencia estaría relacionada con las bajas dosis administradas. La resistencia simultánea a las tres drogas, pero no a una o dos, resultó marcadora de fracaso terapéutico. Se observó en cerca del 6% de los pacientes aparente reversión de la resistencia, en pruebas hechas en aislamientos sucesivos, interpretada como falla en la reproducibilidad de resultados.

Consenso sobre las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en Enterobacteriaceae / Consensus for antimicrobial susceptibility testing for Enterobacteriaceae

En este documento se elaboraron una serie de recomendaciones para el ensayo, lectura, interpretación e informe de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos para las enterobacterias aisladas con mayor frecuencia de especímenes clínicos. Se adoptaron como base las recomendaciones del National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) de los EEUU, los de la subcomisión de Antimicrobianos, de la Sociedad Argentina de Bacteriología Clínica (SADEBAC), división de la Asociación Argentina de Microbiología (AAM) y de un grupo de expertos invitados. En él se indican las resistencias naturales de los diferentes miembros que integran la familia Enterobacteriaceae y se analiza la actividad de las diferentes beta-lactamasas cromosómicas, propias de cada especie, sobre las penicilinas, cefalosporinas y carbapenemes. Se recomiendan los antimicrobianos que se deberían ensayar, ubicados estratégicamente, para detectar los mecanismos de resistencia más frecuentes y cuales se deberían informar de acuerdo a la especie aislada, el sitio de infección y el origen de la cepa (intra o extrahospitalario). Se detallan los métodos de "screening" y de confirmación fenotipíca para detectar beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE) que son más adecuados a nuestra realidad. Por último, se mencionan patrones infrecuentes de sensibilidad/resistencia que deberían verificarse y los perfiles de sensibilidad que pueden hallarse en las distintas enterobacterias en relación con los probables mecanismos de resistencia. Se debe resaltar que el contenido de este documento debe ser considerado como recomendaciones realizadas por expertos argentinos basadas en una revisión de la literatura y datos personales.

Taking into account previous recommendations from the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), the Antimicrobial Committee, Sociedad Argentina de Bacteriología Clínica (SADEBAC), Asociación Argentina de Microbiología (AAM), and the experience from its members and some invited microbiologists, a consensus was obtained for antimicrobial susceptibility testing and interpretation in most frequent enterobacterial species isolated from clinical samples in our region. This document describes the natural antimicrobial resistance of some Enterobacteriaceae family members, including the resistance profiles due to their own chromosomal encoded beta-lactamases. A list of the antimicrobial agents that should be tested, their position on the agar plates, in order to detect the most frequent antimicrobial resistance mechanisms, and considerations on which antimicrobial agents should be reported regarding to the infection site and patient characteristics are included. Also, a description on appropriate phenotypic screening and confirmatory test for detection of prevalent extended spectrum beta-lactamases in our region are presented. Finally, a summary on frequent antimicrobial susceptibility profiles and their probably associated resistance mechanisms, and some infrequent antimicrobial resistance profiles that deserve confirmation are outlined.

Sensibilidad a colistín: evaluación de los puntos de corte disponibles en el antibiograma por difusión / Susceptibility to colistin: evaluation of breakpoints available in disk diffusion test

Las infeccionesproducidas por microorganismos multirresistentes son uno de los mayores problemas en los centros asistenciales. Frecuentemente, sólo las polimixinas muestran actividad “in vitro” frente a aislamientos de bacilos gram-negativos resistentes a los carbapenemes. Sin embargo, el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) no incluye, actualmente, recomendaciones para la realización de las pruebas de sensibilidad para este grupo de antibióticos. Se determinóla actividad de colistín y la correlación entre las pruebas de difusión y dilución de este antibiótico frente a 186 aislamientos contemporáneos en el Hospital de Clínicas “José de San Martín”, siguiendo las recomendaciones generales del NCCLS. Se evaluaron dos puntos de corte: NCCLS 1981 (resistente £ 8 mm y sensible > 11mm) y R. Jones 2001 (resistente £ 11mm y sensible > 14mm). Utilizando el punto de corte del NCCLS 1981 se cometieron los siguientes errores: 0,5% “minor”; 2,2% “major” y 4,4% “very major”, mientras que con el propuesto por R. Jones 2001: 18,9% “minor”; 3,8% “major” y 0,5% “very major”. En conclusión, dado que el punto de corte utilizado por R. Jones 2001 disminuye el error “very major” pero aumenta el “minor” se recomienda la utilización de la concentración inhibitoria mínima (CIM) para confirmar la sensibilidad a colistín cuando sea usada en el tratamiento de infecciones, sin embargo no se detectó resistencia a colistín con halos de inhibición > a 16 mm.

Infections produced by multidrug resistant organisms are one of the greatest problems in health centers. Often, only polymyxines show good activity “in vitro” against the carbapenem resistant gram-negative strains; but the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) documents do not currently provide interpretative criteria for testing the polymyxines.The antimicrobial activity ofcolistin,and the correlation betweenthe agar dilution test and disk diffusion test were evaluated against 186 gram-negative strains isolated at the Hospital de Clínicas “José de San Martín” of Buenos Aires city. All susceptibility tests were performed according to the NCCLS recommendations. Were evaluated two breakpoints, NCCLS 1981 (£ 8mm and >11mm), and R. Jones 2001 (£ 11 mm and > 14 mm). Discrepancies on interpretative category were found (0.5% minor; 2.2% major and 4.4% very major) with NCCLS 1981, and (18.9% minor; 3.8% majorand 0.5% very major) with R. Jones 2001 criteria. Conclusions. In spite of the fact that the breakpoint used by R. Jones 2001decreases the very major error but increases the minor error, according to our results we recommend the use of MIC methods to assist the therapeutic application of colistin; however resistance to colistin was not detected with zone diameters > 16mm.

Antifungal susceptibility testing: Progress and future developments

The establishment of a standardized broth reference method for antifungal susceptibility testing of yeastshas opened the door to a number of interesting and useful developments. The adaptation of the reference macrodilution method to a microdilution method has significantly increased the clinical utility of antifungal susceptibility testing, and both methods are now included in the NCCLS document M27-A. The publication of quality control limits for five antifungal agents, coupled with the estabilisment of interpretive MIC breakpoints for three agents, provides useful parameters to survey clinical isolates of Candida and other yeast species. Adaptations of the M27 microdilution method for testing molds has also proved feasible. These developments have made it possible for a number of recent studies designed to expand the capabilities of laboratories to perform antifungal susceptibility testing and to enhance our understanging of trends in antifungal susceptibility. The availability of reference methods also provides a useful touchstone for the development of commercial products that promise to be more user friendly and to further improve test standartization. Products in varying stages of development include two colorimetric microdilution methods (Sensititre and KPI) and the Etest stable gradient MIC method. Preliminary data indicate that these methods are viable alternatives to the reference method for testing of yeasts. Furthermore, Etest may also prove useful for testing molds. Future expectations for antifungal susceptibility testing includes improved ability to detect amphotericin B resistence, development of an NCCLS document for susceptibility testing of molds, and application of these methods for testing dematophytes. Incorporation of antifungal susceptibility testing methods into the clinical trials of new antifungal agents will facilitate the establishment of clinical correlates and further enhance the clinical utility of antifungal susceptibility testing.

Changing trend in susceptibility pattern of Streptococcus pneumoniae to penicillin in India.

Prior to 1995 all strains of Streptococcus pneumoniae isolated at a tertiary care hospital in south India were uniformly susceptible to penicillin. However, since late 1995 strains of S. pneumoniae with intermediate resistance to penicillin have been observed. Altogether there were 25 such isolates, 9 from invasive (5 from CSF as well as blood, 1 from pleural fluid and 3 from CSF alone) and 16 from noninvasive sites (6 from throat, 6 from sputum, 3 from eye and 1 from ear) respectively, thus 4.6 per cent of S. pneumoniae showed intermediate resistance of a total of 535 strains studied so far. The minimum inhibitory concentration (MIC) values of penicillin, erythromycin, chloramphenicol and cefotaxime were determined by agar dilution method and for confirmation, E test was carried out for penicillin alone. The MIC range obtained for penicillin was between 0.125-1.0 microgram/ml. Kirby-Bauer disc diffusion method was adopted for testing of erythromycin, chloramphenicol, co-trimoxazole, cefotaxime, tetracycline and vancomycin. We observed that none of the strains with intermediate resistance to penicillin were multidrug resistant. These strains belonged predominantly to serotype 14 (n = 10), 7B (n = 9), 19A (n = 3), 7F (n = 2) and 23F (n = 1). Clonality was not observed in the 5 representative strains subjected to Box A finger printing method.

Producción y sensibilidad a microcinas en cepas de Pseudomonas aeruginosa / Pseudomonas aeruginosa microcins: production and sensibility

Se aislaron cepas de Pseudomonas aeruginosa de distintos procesos infecciosos con el objeto de estudiar la capacidad de producir microcinas y la sensibilidad a las elaboradas por otras cepas. Se investigaron por el método de estrías cruzadas en condiciones mínimas de crecimiento y en agar nutritivo, siendo más adecuado el primero. Se analizó el efecto de la presencia de metionina en medio mínimo. El tamaño molecular de las bacteriocinas se estimó con membranas capaces de retener moléculas mayores de 8000 daltons. Los resultados obtenidos indicaron una alta incidencia de cepas productoras de microcinas (85,7 por ciento). La sensibilidad a las mismas fue variada desde 0 a 10 cepas susceptible. Al mantener P. aeruginosa en el laboratorio se redujo el espectro de actividad, mientras que las recientemente aisladas inhibieron mayor número de cepas. Se observó también que disminuyó la sensibilidad a microcinas al conservarse las cepas por más de seis meses. Es conveniente realizar tipificación mediante microcinas con bacterias mantenidas por poco tiempo en cultivo

Streptococcus pneumoniae resistente a antibióticos: aspectos microbiológicos y clínicos / Streptococcus pneumoniae resistant to antibiotics: microbiological and clinical aspects

Se han detectado cepas de S. pneumoníae resistentes a los agentes antimicrobianos en todos los continentes llegando a constituir patógenos predominantes en algunas áreas; muchas de estas cepas son multiresistentes. Debido a la importancia de los neumococos en la etiología de meningitis, cepas con una concentración inhibitorio mínima (CIM) de penicilina G de < 0,06 pg/mi son consideradas sensibles, mientras que las con una CIM de 0,1 a 1 pg/mi son catalogadas como de sensibilidad intermedia y las con CIM de > 1 pg/ mi son denominadas resistentes. Esta revisión comprende los métodos de su detección, las técnicas de estudio de sensibilidad y la terapia de infecciones neumocócicas causadas por cepas resistentes. Recientemente se han definido los métodos de estudio de sensibilidad para ser usados en S. pneumoníae. Se recomienda la evaluación de resistencia a penicilina con discos de 1 pg de oxacilina en todas las cepas aisladas de infecciones clinicamente significativas, el estudio de la actividad in vítro de otros beta-lactámicos en cepas resistentes a penicilina y la determinación de la CIM para otros grupos de agentes antimicrobianos. El tratamiento de infecciones neumocóccicas resistentes depende del grado de resistencia a penicilina y a otros fármacos, de la dosis y vía de administración de ellos, del sitio de la infección, la severidad de la enfermedad y la presencia de condiciones subyacentes. Las recomendaciones actuales de tratamiento son empíricas o están basadas en estudios retrospectivos y por lo tanto, se necesitan estudios prospectivos adecuados que puedan proveer una información más fundamentada